Produktoj

La maniero de kiu efikoj de samtempaj mutacioj kombinas por ŝanĝi enzimecan agadon ne estas facile antaŭvidebla ĉar tiuj efikoj ne estas ĉiam aldonaj en linia maniero.Tial, la karakterizado de la efikoj de samtempaj mutacioj de aminoacidrestaĵoj kiuj ligas la substraton povas fari signifan kontribuon al la kompreno de la substratspecifeco de enzimoj.En la beta-glikozidazo de Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), ambaŭ restaĵoj Q39 kaj E451 interagas kun la substrato kaj tio estas esenca por difinado de substratspecifeco.Duoblaj mutaciuloj de Sfbetagly (A451E39, S451E39 kaj S451N39) estis preparitaj per ejo-direktita mutagenezo, esprimita en bakterioj kaj purigitaj uzante afineckromatografion.Tiuj enzimoj estis karakterizitaj uzante p-nitrofenil-beta-galaktozidon kaj p-nitrofenil-beta-fukosidon kiel substratojn.La k kato/Km-proporcio por unuopaj kaj duoblaj mutaciuloj de Sfbetagly enhavantaj ejo-direktajn mutaciojn ĉe pozicioj Q39 kaj E451 estis uzita por pruvi ke la efiko al la libera energio de ESduobla ponardo (enzim-transira ŝtatkomplekso) de la duoblaj mutacioj (Gdouble). daggerxy) ne estas la sumo de la efikoj rezultiĝantaj el la ununuraj mutacioj (Gdouble daggerx kaj Gdouble ponardo).Tiu diferenco en Gdouble ponardo indikas ke la efikoj de la ununuraj mutacioj parte interkovras.Tial ĉi tiu komuna efiko validas nur unufoje en Gdouble daggerxy.Kristalografiaj datenoj pri beta-glikozidazoj rivelas la ĉeeston de bidenta hidrogena ligo implikanta restaĵojn Q39 kaj E451 kaj la saman hidroksilgrupon de la substrato.Tial, kaj termodinamikaj kaj kristalografiaj datenoj indikas ke restaĵoj Q39 kaj E451 penas reciprokan influon sur siaj respektivaj interagoj kun la substrato.