Produktoj

Oksidativa difekto en DNA-bazoj ofte rezultigas la formadon de oksigenitaj purinoj, precipe 7,8-dihidro-8-oksoguanino (8-oxoG) kaj 7,8-dihidro-8-oksoadenino (8-oxoA), la unua estante puto- konata mutagena lezo.Ĉar 8-oxoG estas facile kondiĉigita de plia oksigenado kompare kun normalaj bazoj, la enmeto de bazo dum DNA-sintezo kontraŭ oksigenita formo de 8-oxoG estis esplorita en vitro.Sinteza ŝablono enhavanta ununuran 8-oxoG-lezon unue estis traktita kun malsamaj unu-elektronaj oksidantoj aŭ sub singlet-oksigenkondiĉoj kaj tiam submetita al primer-etendaĵo katalizita per Klenow-fragmento ekso- (Kf exo-), bovida timuso DNA polimerazo alfa (pol alfa) ) aŭ homa DNA-polimerazo betao (pol betao).Konsekvence kun antaŭaj raportoj, dAMP kaj dCMP estas enigitaj selekteme kontraŭ 8-oxoG kun ĉiuj tri DNA-polimerazoj.Kurioze, oksigenado de 8-oxoG estis trovita indukti malsekan kaj dGMP-enmeton kontraŭ la lezo de Kf-ekso- kun pasema inhibicio de amora etendo okazanta ĉe la loko de la modifita bazo.Krome, la lezo konsistigas blokon dum DNA-sintezo de pol-alfao kaj pol-betao.Eksperimentoj kun 8-oxoA-modifita ŝablonoligonukleotido montras ke kaj 8-oxoA kaj oksigenita formo de 8-oxoA rekta enmeto de dTMP de Kf ekso-.Mas-spektrometria analizo de 8-oxoG-enhavantaj oligonukleotidoj antaŭ kaj post oksigenado kun IrCl62-estas kongrua kun oksigenado de ĉefe la 8-oxoG-ejo, rezultigante formadon de guanidinohidantoin-duono kiel la plej grava produkto.Neniu indico por formado de bazaj ejoj estis akirita.Tiuj rezultoj montras ke oksigenita formo de 8-oxoG, eventuale guanidinohidantoin, povas direkti mislegadon kaj misenmeton de dNTPoj dum DNA-sintezo.Se tia procezo okazus en vivo, ĝi reprezentus punktan mutagenan lezon kondukantan al G-->T kaj G-->C transversioj.Tamen, la ekvivalenta oksigenita formo de 8-oxoA ĉefe montras ĝustan enmeton de T dum DNA-sintezo kun Kf ekso-.