Produktoj

X-gal (ankaŭ mallongigita BCIG por 5-bromo-4-chloro-3-indolil-β-D-galaktopiranozido) estas organika komponaĵo konsistanta el galaktozo ligita al anstataŭigita indolo.La kunmetaĵo estis sintezita de Jerome Horwitz kaj kunlaborantoj en 1964. La formala kemia nomo ofte estas mallongigita al malpli precizaj sed ankaŭ malpli ĝenaj frazoj kiel bromokloroindoxyl galaktozido.La X de indoksilo povas esti la fonto de la X en la X-gal kuntiriĝo.X-gal ofte estas uzita en molekula biologio por testi pri la ĉeesto de enzimo, β-galaktosidase, en la loko de ĝia kutima celo, β-galaktozido.Ĝi ankaŭ kutimas detekti agadon de tiu enzimo en histokemio kaj bakteriologio.X-gal estas unu el multaj indoksilglikozidoj kaj esteroj kiuj donas nesolveblajn bluajn kunmetaĵojn similajn al indigofarbo kiel rezulto de enzim-katalizita hidrolizo.

X-gal estas analogo de laktozo, kaj tial povas esti hidroligita per la β-galaktosidase-enzimo kiu fendas la β-glikozidan ligon en D-laktozo.X-gal, kiam fendita per β-galaktosidase, donas galaktozon kaj 5-bromo-4-kloro-3-hidroksiindol - 1. Ĉi-lasta tiam spontanee dimeriĝas kaj estas oksigenita en 5,5'-dibromo-4,4'-dikloron. -indigo - 2, intense blua produkto, kiu estas nesolvebla.X-gal mem estas senkolora, tiel ke la ĉeesto de blu-kolora produkto povas tial esti utiligita kiel testo por la ĉeesto de aktiva β-galaktosidase.Tio ankaŭ permesas ke bakteria β-galaktosidase (tielnomita lacZ) estu utiligita kiel raportisto en diversaj aplikoj.

En du-hibrida analizo, β-galaktosidase povas esti utiligita kiel raportisto por identigi proteinojn kiuj interagas kun unu la alian.En tiu metodo, genarbibliotekoj povas esti ekzamenitaj por proteininteragado uzante giston aŭ bakterian sistemon.Kie ekzistas sukcesa interagado inter proteinoj estantaj ekzamenita, ĝi rezultigos la ligadon de aktivigdomajno al reklamanto.Se la reklamanto estas ligita al lacZ-geno, la produktado de β-galaktosidase, kiu rezultigas la formadon de blu-pigmentitaj kolonioj en la ĉeesto de X-gal, do indikos sukcesan interagadon inter proteinoj.Ĉi tiu tekniko povas esti limigita al ekzamenado de bibliotekoj de grandeco malpli ol ĉirkaŭ 106. La sukcesa fendo de X-gal ankaŭ kreas rimarkinde malbonan odoron pro la volatiligo de indolo.

Ĉar X-gal mem estas senkolora, la ĉeesto de blu-kolora produkto povas esti utiligita kiel testo por la ĉeesto de aktiva β-galaktosidase.

Tiu facila identigo de aktiva enzimo permesas al la geno por βgalaktosidase (la lacZ geno) esti utiligita kiel raportistogeno en diversaj aplikoj.