Produktoj

Proteina fosforiligo reguligas diversajn ĉelajn funkciojn kaj ludas ŝlosilan rolon en la frua evoluo de plantoj.Por kompletigi kaj pligrandigi antaŭajn esplorojn de proteinfosforiligo en Arabidopsis-plantidoj ni uzis alternativan aliron kiu kombinas proteinekstraktadon sub ne-denaturaj kondiĉoj kun senmovigita metal-jona afineckromatografio (IMAC) riĉigo de sendifektaj fosfoproteinoj en Rubisko-malplenigitaj eltiraĵoj, sekvita de identigo. uzante dudimensian ĝelelektroforezon (2-DE) kaj likvan kromatografio-tandan mas-spektrometrion (LC-MS/MS).En-ĝela tripsindigestado kaj analizo de elektitaj ĝelpunktoj identigis 144 fosforilatitajn peptidojn kaj restaĵojn, de kiuj nur 18 fosfopeptidoj kaj 8 fosfositoj estis trovitaj en la PhosPhAt 4.0 kaj P3DB Arabidopsis thaliana fosforilatigaj ejdatumbazoj.Pli ol duono de la 82 identigitaj fosfoproteinoj estis implikitaj en karbonhidrata metabolo, fotosintezo/spirado aŭ oksidativa streĉa respondmekanismo.Riĉigo de sendifektaj fosfoproteinoj antaŭ 2-DE kaj LC-MS/MS ŝajnas plifortigi detekton de fosforilitaj treoninaj kaj tirozinrestaĵoj kompare kun metodoj kiuj utiligas peptid-nivelan riĉigon, sugestante ke la du aliroj estas iom komplementaj laŭ fosforiliga ejpriraportado.Komparante rezultojn por junaj plantidoj kun tiuj akiritaj antaŭe por maturaj Arabidopsis-folioj identigis kvin proteinojn kiuj estas diferencige fosforilitaj en tiuj histoj, montrante la potencialon de tiu tekniko por esplori la dinamikon de proteinfosforiligo dum plantevoluo.