Produktoj

La membrantopologio de la colicin E1 kanaldomajno estis studita per fluoreskeca resonanca energitransigo (FRET).La FRET implikis genetike ĉifritan fluoreskan aminoacidon ( kumarino ) kiel la organdonacanto kaj selekteme etikeditan cisteinrestaĵon ligitan kun DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimido) kiel la FRET-akceptanto.La fluoreska kumarinrestaĵo estis integrigita en la proteinon per orta tRNA/aminoacil-tRNA sintetaza paro kiu permesis selekteman enkadrigo en iu ejo ene de la kolicina kanaldomajno.Ĉiu variaĵo enhavis ĉesan (TAG) mutacion por kumarinenkorpiĝo kaj cisteinan (TGT) mutacion por DABMI-aldonaĵo.Ses interhelikaj distancoj ene de helicoj 1-6 estis determinitaj uzante FRET-analizon por kaj la solveblaj kaj membran-ligitaj ŝtatoj.La FRET-datenoj montris grandajn ŝanĝojn en la interhelikaj distancoj inter helicoj 3-6 sur membranunuiĝo disponigante novajn sciojn pri la membran-ligita strukturo de la kanaldomajno.Ĝenerale, la kumarin-DABMI FRET-interhelikaj efikecoj malpliiĝis sur membranligado, konstruante sur la ombrelmodelo por la colicinkanalo.Prova modelo por la fermita stato de la kanaldomajno estis evoluigita surbaze de aktualaj kaj antaŭe publikigitaj FRET-datenoj.La modelo sugestas cirklan aranĝon de helicoj 1-7 en dekstruma direkto de la eksterĉela flanko kaj membrana intervizaĝa asocio de helicoj 1, 6, 7, kaj 10 ĉirkaŭ la centra transmembrana harpinglo formita per helicoj 8 kaj 9.