Produktoj

Por specife kvantigi plurajn metabolitojn de 5-fluorouracil (5-FU) kaj du endogenajn monofosfatajn nukleotidojn, ni evoluigis originalan metodon bazitan sur likva kromatografio-tanda mas-spektrometrio (LC-MS/MS).Tiu analizo permesis la persistemon de: (i) la intraĉela produktado de 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monofosfato (5-FdUMP) de 5-FU aŭ 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) la efiko de 5-FdUMP-koncentriĝo sur la intraĉela 2′-deoxyuridine-5′-monofosfato (dUMP)/timidino-5′-monofosfato (TMP) rilatumo, kaj (iii) la sekrecia amplekso de 5-FdUMP kaj 5-FU el homaj kulturitaj ĉeloj per ABC-transportiloj.Sub niaj eksperimentaj kondiĉoj, ĉeloj estis kovataj per 5-FU aŭ 5-FUrd.Tiam, ĉelaj proteinoj estis precipitataj de metanolo.Ĉi tiu proceduro disponigis altan ekstraktan reakiron.Krome, por mezuri 5-FU kaj 5-FdUMP-sekrecion de ĉeloj, ni efektivigis kvantigon de ĉi tiuj molekuloj en kulturmedio.Amaskomunikilaro estis aŭ rekte injektitaj (5-FU) aŭ sub iris solidfaza eltiro uzante Oasis Wax eltiro kartoĉo (5-FdUMP).Apartigo de analitoj estis farita sur dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) kolumno kun izokrata reĝimo uzanta amonian formitan bufron/metanol/akvon (5/5/90, v/v) kiel moveblan fazon.La rultempo ne superis 6,2 min.La analitoj estis jonigitaj en elektrospray-interfaco sub negativa jona reĝimo.Ni validigis la metodon en intervalo de 2.5-150 ng mL −1 laŭ la kunmetaĵoj.Inter- kaj inter-analiza ŝanĝebleco estis pli malalta ol 10% dum sep tagoj.Ĉiuj kunmetaĵoj estis stabilaj en ĉeloj aŭ en kulturmedio kiam provaĵoj estis stokitaj je −20 °C dum almenaŭ du semajnoj, kaj post tri frostiĝ-degelcikloj.Neniu matrica efiko estis observita en ambaŭ amaskomunikiloj.