Produktoj

Nova alt-efikeca likva kromatografio-analizo por glikosiltransferazoj bazita sur derivado kun antranila acido kaj fluoreskeca detekto.

Analizoj estis evoluigitaj uzante la unikan etikedan kemion de 2-aminobenzoika acido (2AA; antranila acido, AA) por mezurado de agadoj de kaj β1-4 galaktosiltransferazo (GalT-1) kaj α2-6 sialiltransferazo (ST-6) per alt-efikeca likvaĵo. kromatografio (HPLC) kun fluoreskeca detekto (Anumula KR. 2006. Progresoj en fluoreskecaj derivadmetodoj por alt-efikeca likva kromatografa analizo de glikoproteinkarbohidratoj. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetilglukozamino (GlcNAc) kaj N-acetyllactosamine estis utiligitaj kiel akceptantoj kaj uridindifosfato (UDP) -galaktozo kaj citidinmonofosfato (CMP) -N-acetilneŭramina acido (NANA) kiel organdonacantoj por GalT-1 kaj ST-6, respektive.Enzimaj produktoj estis etikeditaj surloke kun AA kaj estis apartigitaj de la substratoj sur TSKgel Amide 80-kolumno uzante normal-fazajn kondiĉojn.Enzimaj unuoj estis determinitaj de la pintaj areoj kompare kun la samtempaj derivitaj normoj Gal-β1-4GlcNAc kaj NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Lineareco (tempo kaj enzimkoncentriĝo), precizeco (intra- kaj interanalizo) kaj reproduktebleco por la analizoj estis establitaj.La analizoj estis trovitaj esti utilaj en monitorado de la enzimagadoj dum izolado kaj purigo.La analizoj estis tre sentemaj kaj rezultis egalaj aŭ pli bonaj ol la tradiciaj radioaktivaj suker-bazitaj mezuradoj.La analizformato ankaŭ povas esti uzita por mezurado de la agado de aliaj transferazoj, kondiĉe ke la karbonhidratakceptantoj enhavas reduktan finon por etikedado.Testo por glikoproteinakceptantoj estis evoluigita uzante IgG.Mallonga HPLC-profila metodo estis evoluigita por la apartigo de IgG-glikanoj ( dujara G0, G1, G2, mono- kaj dizialilata), kiu faciligis la persistemon de GalT-1 kaj ST-6-agadoj en rapida maniero.Krome, ĉi tiu profila metodo devus pruvi utila por monitori la ŝanĝojn en IgG-glikanoj en klinikaj agordoj.